流式細胞儀技術（FCM）原理及應用

流式細胞術（FCM）簡述 
流式細胞術 （Flow Cytometry）是70年代發展起來的一種利用流式細胞儀對細胞等生物粒子的理化及生物學特性（細胞大小、DNA/RNA含量、細胞表面抗原表達等）進行定量、快速、客觀多參數相關檢測分析的新技術。它借鑒了熒光顯微鏡技術與血球計數原理,同時利用熒光染料,激光技術,單抗技術以及計算機技術的發展,大大提高了檢測速度與統計性,而且從同一個細胞中可以同時測得多種參數,為生物醫學與臨床檢驗學發展提供了一個的視角和強有力的手段。 
FCM在生命科學中的應用,標志著細胞生物學、腫瘤學、免疫學等進入了細胞和分子水平的研究。為從微觀認識細胞及橫向比較特征提供了精密、的方法和儀器。 

FCM的基本原理 
1、流式細胞儀系統流程： 
標本→激光系統→流動系統→信號處理系統→放大系統→計算機系統→結果打印 
2、基本原理： 
待測標本制備成單細胞懸液通過熒光染色后進入充滿鞘液的流動室，鞘液壓力與樣品流壓力是不同的，當二者的壓力差異達到一定程度時，鞘液裹挾著樣品流中細胞排成單列逐個經過激光聚焦區。如果我們將細胞中感興趣的部分特異性的標上熒光染料，那麼這些染料將在細胞通過激光檢測區時受激光發出特定波長的熒光,通過一定波長選擇通透性的濾色片,我們可將不同波長的散射光、熒光信號區分開來，并送到不同的光電倍增管中，經過一系列的信號轉換、放大，數字化處理，我們就可以在計算機直觀的統計染上各種熒光染料的細胞各自的百分率。選擇不同的單克隆抗體及熒光染料，我們可以利用FC同時測定一個細胞上的多種不同特征；如果對具有某種特征的細胞有興趣，我們還可以利用流式的分選功能將其分選出來，以便進一步培養、研究。 
3、意義： 
FCM與單克隆抗體結合，可對細胞表面和細胞內抗原、癌基因蛋白及膜受體進行定量檢測，成為臨床檢驗與研究的重要指標。流式免疫熒光技術不僅能將表達位點的細胞群區分開來，而且還能進一步區分各細胞亞群。對免疫功能障礙、造血系統疾病及惡性腫瘤的研究、診斷、治療和預后評估都能起到重要作用

應用分類
1、免疫表型分析
1993年在波士頓召開的人類白細胞分化抗原會議（leukocyte differentiation antigen,HLDA）
將CD抗原（cluster of differentiation）分為T細胞、B細胞、髓細胞、血小板、內皮細胞、自然殺傷細胞、活化抗原、黏附因子、細胞因子和細胞因子受體等九個組，確立了48種新抗原。
1996年11月在神戶召開的第六屆HLDA會議上，又有30多種新抗原被確認，CD編號已達166個，CD抗原有197種。2000年7月，第七屆人類白細胞分化抗原會議的召開，CD抗原已達247種。CD系列在免疫學中常被用于:（1）CD抗原的基因克隆，新CD抗原及新配體的發現；（2）CD抗原功能與結構的關系；（3）細胞激活途徑和膜信號的傳遞；（4）細胞分化過程中的調控；（5）細胞亞群的功能。

免疫表型分析的應用

1.檢測淋巴細胞亞群，監測細胞免疫狀態（淋巴細胞是機體免疫系統功能重要的大細胞群，在免疫應答過程 中，末梢血淋巴細胞發育分化成為功能不同的亞群。當亞群的數量和功能
發生異常時，就能導致機體免疫紊亂并產生病理變化。FCM可以同時檢測一種或幾種淋巴細胞表面抗原，將不同的淋巴細胞亞群區分開來，并計算出它們相互間的比例，通過對病人淋巴細胞各亞群數量的測定來監控病人的免疫狀態，并指導治療）。
2.白血病/淋巴瘤免疫分型 ；
3.HLA組織配型及HLA與某些疾病的關系；
4.干祖細胞的定量及成分分析；
5.粘附分子;TCR多態性檢測;腫瘤癌基因及抑癌基因蛋白產物的檢測;細胞內酶;耐藥蛋白的分析等等；
6.疾病診斷:為疾病診斷提供直接的或支持診斷的依據；
7.免疫調節：細胞因子/受體的相互作用、共刺激分子受體/配體的相互作用；
8.發病機理：腫瘤的發病與機體的免疫力低下、以及信號傳遞障礙有關；
9.藥物/疫苗效果的評價：腫瘤生物治療的時機選擇、以及效果的監測 ；
10.免疫狀態評價： 移植、放化療等